? ? ?1)液相色譜儀HPLC的色譜柱的重要部件??：??

關于液相色譜儀的HPLC的色譜柱(分離柱)是極其重要的部件之一，根據(jù)填料的不同一般可分為：反相柱、正相柱、其它柱三類，分別簡述如下。

(1)正相色譜柱：正相色譜柱也經(jīng)常被使用，約占20%左右。

(2)反相色譜柱：它是使用最多的一種色譜柱;一般約占75%左右;?其中，C18柱約占?65%;C8柱占15%左右;苯基柱<5%。反相色譜是目前應用得最為廣泛的一種高效液相色譜方法。C18?在反相色譜中應用得最為廣泛，大概超過一半以上。

(3)其它色譜柱?(手性柱,?離子交換柱):?約占10%左右。

? ? ?要用好、保護好色譜柱，是一個需要特別重視的問題，如果稍有不慎，就有可能降低色譜柱的柱效、縮短色譜柱的壽命，甚至損壞色譜柱。

2)液相色譜儀色譜柱分類：

　　從類型上來說，色譜柱可以分為制備型和分析型兩大類，一般分析型的柱使用最多。如果細分，色譜柱又可以分為常規(guī)柱、窄徑柱、毛細管柱、制備柱和半制備柱等等。為提高分析速度，有人經(jīng)常使用短柱，其柱長5-10cm，填料粒徑多為3μm左右。很多分析工作者比較強調分析靈敏度，因此發(fā)展了窄徑柱、毛細管柱和微徑柱。這些柱子的優(yōu)點是：所需樣品少、所需流動相少、靈敏度高、容易控制溫度。但是它們對檢測器的流動池、柱外的管道、接頭、進樣閥等要求大大提高了。

　 ?色譜柱的柱效是最重要的關鍵指標，一般都取決于固定相的性能和裝柱技術。一般HPLC的色譜柱固定相(填料)大致有三種：硅膠或以硅膠為基質的填料、聚合物填料和無機物填料。正相色譜柱大多采用硅膠類填料，反相色譜柱則多以硅膠為基質組成的官能團類的填料。以聚合物為填料的色譜柱最大的特點是PH值可在1-14之間都能用，疏水性強。但無機填料色譜柱一般只是限于特殊用途，比較少用。

液相色譜儀

?3)分離系統(tǒng)(色譜柱)

　 ?人們一般所講的液相色譜儀的分離系統(tǒng)主要指色譜柱及其附件，它是一個非常重要、非常復雜的核心部分。一般液相色譜柱的結構如下圖所示，包括柱管(大多采用不銹鋼制作)、填料(后面將詳細討論)、接頭(一般用不銹鋼制作)、卡套(一般用不銹鋼制作)、壓帽、密封環(huán)、濾片、螺絲(一般用不銹鋼制作)、連接管道(一般用不銹鋼制作)等等。

液相色譜儀色譜柱的篩板(過濾板)一般是用不銹鋼或鈦合金材料制作，其孔徑一般在0.2-20μm之間，孔徑大小主要取決于柱填料的粒度，它是一個非常重要的零件，它可以防止填料漏出。同時，防止色譜柱工作時雜質進入柱內引起分離效果下降，甚至容易引起色譜柱堵塞等等。色譜柱與輸液管連接處一般需要使用不銹鋼制作的卡套和不銹鋼制作的固緊接頭螺釘，它們也非常重要，否則色譜柱系統(tǒng)會漏液，結果使柱壓下降、流動相或樣品漏出，嚴重影響分析測試結果，甚至不能進行分析測試工作。

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　 因為HPLC的樣品都為溶液，而溶液受溫度影響很大，例如：溫度對溶劑的溶解能力、色譜柱的柱效、流動相的粘度都會產(chǎn)生影響。如果溫度升高，可能會提高溶液在流動相中的溶解度，可以降低分配系數(shù)K;降低流動相粘度可以降低柱壓，有利于保護色譜柱，延長色譜柱的壽命。但是，溫度不能太高，否則會產(chǎn)生氣泡。

HPLC工作者還必須注意不同的溫度，對色譜柱的保留時間、分離效果，及檢測器的靈敏度都會有影響，特別是對示差折光器的靈敏度、最小檢出限的影響很大。所以，很多HPLC特別注意對恒溫系統(tǒng)的設計，這些都是HPLC設計者、使用者應該重視的問題。